Бүтээгдэхүүн

Антранилийн хүчил ба флюресценцийг илрүүлэхэд суурилсан гликозилтрансферазын шинэ өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн шинжилгээ.

Өндөр үзүүлэлттэй шингэнээр β1-4 галактозилтрансфераза (ГалТ-1) ба α2-6 сиалилтрансфераза (ST-6)-ын үйл ажиллагааг хэмжихийн тулд 2-аминобензойн хүчил (2AA; антранилийн хүчил, АА) өвөрмөц шошголох химийн аргыг ашиглан шинжилгээг боловсруулсан. Флюресцент илрүүлэх хроматографи (HPLC) (Anumula KR. 2006. Гликопротейн нүүрсустөрөгчийн өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн шинжилгээнд зориулсан флюресценцийн дерватизацийн аргуудын дэвшил. Анал биохим. 350:1-23).N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) болон N-ацетиллактозаминыг акцептороор, уридин дифосфат (UDP)-галактоз ба цитидин монофосфат (CMP)-N-ацетилнейрамины хүчил (NANA)-ийг GalT-1 ба ST-6-ийн донороор тус тус ашигласан.Ферментийн бүтээгдэхүүнийг АА-тай газар дээр нь шошгож, TSKgel Amide 80 багана дээрх субстратуудаас хэвийн фазын нөхцөлд тусгаарласан.Гал-β1-4GlcNAc болон NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc зэрэг үүсмэл стандартуудтай харьцуулах замаар ферментийн нэгжийг оргил цэгүүдээс тодорхойлсон.Шинжилгээний шугаман чанар (цаг хугацаа ба ферментийн концентраци), нарийвчлал (дотоод болон хоорондын шинжилгээ) болон давтагдах чадварыг тогтоосон.Тусгаарлах, цэвэршүүлэх явцад ферментийн үйл ажиллагааг хянахад тус шинжилгээний үр дүнтэй болохыг тогтоожээ.Шинжилгээ нь маш мэдрэмтгий байсан бөгөөд цацраг идэвхт элсэн чихэрт суурилсан уламжлалт хэмжилттэй тэнцүү эсвэл илүү сайн хийгдсэн.Шинжилгээний форматыг нүүрс ус хүлээн авагчид шошгон дээр буулгах төгсгөл агуулсан байвал бусад трансферазуудын идэвхийг хэмжихэд ашиглаж болно.IgG ашиглан гликопротейн хүлээн авагчдын шинжилгээг боловсруулсан.IgG гликануудыг (хоёр арван үет G0, G1, G2, моно- болон диалилжуулсан) салгах HPLC профайлын богино аргыг боловсруулсан бөгөөд энэ нь GalT-1 ба ST-6-ийн үйл ажиллагааг хурдан тодорхойлоход тусалсан.Цаашилбал, энэ профайл тодорхойлох арга нь эмнэлзүйн нөхцөлд IgG гликаны өөрчлөлтийг хянахад ашигтай байх болно.