Бүтээгдэхүүн

Уургийн фосфоржилтын сүлжээнүүд асар их төвөгтэй байдаг тул протеомын хэмжээнд фосфоржилтын үйл явдлын шинжилгээ нь аналитикийн томоохон сорилт хэвээр байна.Энэ ажилд бид Lys-N, Lys-C, трипсин зэрэг нь фосфопротеомын дэлхийн шинжилгээнд хувь нэмрээ оруулах чадвартай холбоотой харилцан уялдаатай байдлыг үнэлдэг.Бага рН-ийн хүчтэй катион солилцооны боловсронгуй хувилбарыг N-терминал ацетилжүүлсэн, фосфоржуулсан, өөрчлөгдөөгүй пептидүүдийг үр дүнтэй салгахад ашигласан.Нийт 5036 илүүдэл бус фосфопептидыг гурван ферментийн хослолыг ашиглан 1 мг уургаас 1% -иас доош хуурамч илрүүлэлтээр тодорхойлж болно.Бидний мэдээллээс харахад өөр өөр протеазаар үүсгэгдсэн фосфопептидын мэдээллийн багц хоорондын давхцал ахиу байсан бол ижил төстэй үүсгэгдсэн хоёр триптик мэдээллийн багц хоорондын давхцал дор хаяж 4 дахин их байгааг илрүүлсэн.Ийм байдлаар Lys-N ба трипсиныг зэрэгцүүлэн хэрэглэснээр илэрсэн фосфопептидын тоо дан трипсинтэй харьцуулахад 72%-иар нэмэгдсэн бол трипсиныг хуулбарлах туршилт ердөө 25%-иар нэмэгдсэн байна.Тиймээс, зөвхөн трипсин ба Lys-N-ийн өгөгдөлд анхаарлаа төвлөрүүлэхдээ бид 4671 илүүдэлгүй фосфопептидийг тодорхойлсон.Илрүүлсэн газруудад хийсэн цаашдын дүн шинжилгээ нь Lys-N ба трипсиний мэдээллийн багц нь мэдэгдэхүйц ялгаатай фосфоржилтын сэдвүүдээр баяжуулсан болохыг харуулсан бөгөөд энэ нь фосфопротеомын шинжилгээнд мультипротеазын хандлагууд маш үнэ цэнэтэй болохыг нотолж байна.